13.1高压液相色谱法13.1.1范围
本标准规定了用高压液相色谐法测定生活饮用水及其水源水中的微囊藻毒素。本法适用于生活饮用水及其水源水中微囊藻毒素的测定。
本法*低检测质量分别为:微囊藻毒素-RR,6 ng;微囊藻毒素-LR,6ng。若取5L水样测定,则*低检测质量浓度分别为:微囊藻毒素-RR,0.06 ug/L;微囊藻毒素-LR,0.06 ug/L。
13.1.2原理
水样过滤后,滤液(水样)经反相硅胶柱富集萃取浓缩﹐藻细胞(膜样)经冻融萃取,反相硅胶柱富集萃取浓缩后,分别用高压液相色谱分析。
13.1.3试剂
13.1.3.1oDS硅胶柱(C,8固相萃取小柱)。
13.1.3.2微囊藻毒素标样:
散囊藻毒素-RR(20%甲醇溶液):10ug/mL。微囊藻毒素-LR(20%甲醇溶液):10 ug/mL。
13.1.3.3。
13.1.3.4甲醇。
13.1.3.5三。
13.1.3.6高纯氮(99.999%)。
13.1.4仪器
13.1.4.1高压液相色谱仪,配二极管阵列检测器和3D色谱工作站。
13.1.5样品.
13.1.5.1样品处理
每个样品取水样5 L,GF/C过滤,滤液(水样)和藻细胞(膜样)分别进行不同的处理。
13.1.5.1.1水样处理:滤液→过5 g ODS柱→依次用50 mL去离子水、50 mL20%甲醇淋洗杂质→50 mL80%甲醇洗脱→洗脱液在水浴中用氮气流挥发至干燥,残渣溶于10 mL20%甲醇→过C柱→10 mL****甲醇洗脱→洗脱液在水浴中用氮气流挥发至干燥,残渣溶于1 mL色谱纯甲醇→一20℃保存,待测。
13.1.5.1.2︰膜样处理:菜细胞→冻融三次→100 mL5%乙酸萃取30 min→以4 000 r/min离心10min,重复三次,合并上清液→上清液过500 mg ODS柱→用15mL****甲醇洗脱→洗脱液在水浴中用氮气流挥发至干燥,残渣溶于10 mL20%甲醇→过Cs柱→10mL****甲醇洗脱→洗脱液在水浴中用氮气流挥发至干燥,残渣溶于1 mL色谱纯甲醇-→—20℃保存,待测。
上述5 g ODS柱用50 mL****甲醇与50 mL去离子水预活化;Cs柱用20 mL****甲醇与20mL20%甲醇预活化;500 mg ODS柱用6 mL. ****甲醇与6 mL去离子水预活化。
饮用水中的MC-RR,MC-LR的量是上述水样处理和膜样处理测定结果之和。
13.1.6分析步骤
13.1.6.1仪器调整
13.1.6.1.1色谐柱:ODS Cg 250 mm×4.6 mm.
13.1.6.1.2流动相:＋水＋三一(38十62＋0.04)。13.1.6.1.3流动相流量:0.70 mL/ min。
13.1.6.1.4检测波长:238 nm。
13.1.6.1.5 柱温:35℃。
13.1.6.2校准
13.1.6.2.1校准方法:外标法。13.1.6.2.2标准样品。
13.1.6.2.3使用次数:推荐采用每月绘制一次标准曲线,每次测试时选择一个浓度定标进行质量控制。
13.1.6.2.4液相色谱法中使用标准样品的条件:
A标准样品进样体积与试样的进样体积相同。
